Versiegelungs- und Kontaminationsprobleme in Multiwell -Zellkulturplatten

Laden und Umgang mit Multi-Well-Zellkulturplatten:

Die Zellkulturplatte folgt auch dem Prinzip der strengen Asepsis bei der Durchführung von Zelloperationen. Alle Operationen müssen standardisiert und wissenschaftlich sein und haben keinen zusätzlichen Einfluss auf das Zellwachstum. Das häufigste Problem ist, wie die Gleichmäßigkeit der Zellen nach Zugabe der Probe sichergestellt und die Auswirkungen der Veränderung des Mediums auf den Wachstumszustand der Zellen minimiert werden kann.

fragen:
Die Deckel von 96 und 24-Well-Kulturplatten oder Petrischalen sind sehr locker, was für die Belüftung geeignet ist, aber auch Bakterien, Schimmel und andere Schadstoffe einrutschen?

antworten:
Der Deckel ist sehr locker, was zur semi-offenen Kultur gehört, und der Zweck davon ist, zu belüften (in der Tat soll das CO2 außerhalb der Kulturschale vollständig mit der Kulturschale austauschen und den pH-Wert der Kultur aufrechterhalten Mittel).
Alles hat Vor- und Nachteile, was natürlich die Möglichkeit der Verschmutzung erhöht. Darüber hinaus verdampft die Flüssigkeit in der Schale, was sich für eine präzise Dosierung von Medikamenten auszeichnet. Daher sind die folgenden zwei Maßnahmen erforderlich: a. Die Luft im Inkubator muss sauber sein (regelmäßig ultraviolettes Licht, Alkoholschrubben, und der Inkubator sollte so wenig wie möglich geöffnet und geschlossen werden) b. Die Luftfeuchtigkeit im Inkubator muss immer bei 100% gehalten werden (die Spüle mit sterilem destilliertem Wasser im Inkubator).
Genau wie eine Petrischale ist es auch ein Behälter mit einem verkehrten Deckel und wird nicht verschmutzt. Vor allem wegen des Unterdrucks des Luftstroms, der durch die "L" -Rande der Abdeckung erzeugt wird, gibt es Mikroorganismen, die am Staub befestigt sind, und der vom Luftstrom getragene Staub kann nicht durch die Kante der Abdeckung gelangen, die einen Unterdruck erzeugt. Der Beatmungseffekt erfolgt nur durch die Diffusion von Luft, und es wird kein Luftstrom erzeugt, sodass er nur atmet und nicht durch Bakterien eindringt.

fragen:
Unter Verwendung einer 24-Well-Platte gibt es in einigen Brunnen (in der ultra-verarbeiteten Bank) Operationen, und es gibt Zellen, die in anderen Brunnen kultiviert werden müssen. Ich bin besorgt, dass dies zu Kontamination führen wird. Ich weiß nicht, worauf ich achten soll?

antworten:
Wenn der Vorgang in der ultra-geplanten Bank standardisiert ist, sollte dies in Ordnung sein. Ich denke, Sie können die Abdeckung der Kulturplatte voll ausnutzen, versuchen, nur die zu bedienenden Löcher freizulegen und die anderen Löcher mit Abdeckungen abzudecken.
Überlegen Sie sich vor der Verwendung umfassend und nutzen Sie alle Löcher voll und nutzen Sie sie voll und nutzen Sie sie voll und nutzen Sie sie voll aus. Wenn Sie nur ein paar Löcher verwenden müssen, können Sie nur eine Seite verwenden und den Rest mit einer Abdeckung abdecken. Ich bin es gewohnt, zuerst das rechte Loch zu verwenden (es ist bequem, die rechte Hand Proben hinzuzufügen).

Verwenden Sie beim Betrieb ein paar Glasrutschen, um eine Seite des Bretts zu erhöhen, und öffnen Sie die Abdeckung nicht vollständig, im Allgemeinen kein Problem.
Unebene Zellverteilung und Lösungen

fragen:
Zellen werden auf der Kulturplatte geimpft, und die Zellen sammeln sich immer im peripheren Teil, wie man damit umgeht?

antworten:
Darf ich fragen, wie Ihre Zellen gemischt sind? Pipettiert oder schüttelt es die Kulturplatte? Wenn es das letztere ist und es in einem Kreis geschüttelt wird, ist es sehr wahrscheinlich, dass die Zellen aufgrund der Zentrifugalkraft in den peripheren Teil geworfen werden, was zu weniger Zellen in der Mitte führt. Mehr als vier Wochen!
Hier ist ein guter Weg: Bevor Sie die Samenplatte kultivieren, geben Sie die Kulturplatte für einige Stunden Sättigung in den Inkubator und nehmen Sie ihn dann heraus. Die Kraft sollte beim Pflanzen der Zellen leicht sein. Durch das langsame Hinzufügen der Zellsuspension fließen in die Brunnen der Platte, und die kultivierten Zellen wachsen grundsätzlich gleichmäßig. Denken Sie daran, niemals mit einem Schüttler zu schütteln, sonst werden Ihre Zellen zusammenklumpen, wie Sie sagten.
Je kleiner der Lochdurchmesser der Kulturplatte, desto offensichtlicher ist dieses Phänomen. Dieses Phänomen ist für 24- und 96-Well-Platten unvermeidbar, da die Flüssigkeit an der Wand haftet, so dass die Kulturlösung im Brunnen keinen flüssigen Niveau bildet, aber die Peripherie hoch ist, genau wie ein konkaver Spiegel. Bei Verwendung dieser beiden Arten von Öffnungsplatten ist es jedoch nicht möglich, aufgrund der Notwendigkeit einer zusätzlichen Intervention eine ausreichende Menge an Kulturlösung hinzuzufügen, damit die Zellen zusammen mit der Kulturlösung "Kantensammlung" erscheinen. Es hängt davon ab, welche Indikatoren Sie beobachten müssen. Wenn es sich um MTT handelt, wirkt sich die Immunhistochemie aufgrund der Zellschichtung auf die Ergebnisse aus.
Achten Sie beim Verdauen von Zellen auf die gleichmäßige Pipette, um Zellklumpen zu vermeiden, und die Menge an Kulturlösung in der Brunnen sollte ausreichen. Fügen Sie im Allgemeinen genügend Kulturlösung beim Inokulieren hinzu und ändern Sie die Lösung einmal beim Zugabe einer Intervention. Die Menge an Kulturlösung, die der Interventionslösung hinzugefügt wird, entspricht der Menge der Kulturlösung zum Zeitpunkt der Inokulation. In diesem Fall wird das Phänomen des "Edge -Sets" verbessert, sodass Sie es auch versuchen können.

fragen:
Was ich tat, war das Plaque -Bildungsexperiment. Es ist am besten, die Zellen in einer gleichmäßigen Schicht zu verteilen. Die meisten Löcher sind in Ordnung, wenn das Virus geimpft wird, und einige von ihnen sind nicht einheitlich. Es gibt große Unterschiede in der Zellgruppe. Ich möchte Sie fragen, welche Methode Sie beim Hinzufügen von Zellen verwenden?

antworten:
Es ist entscheidend, die Zellen nach der Verdauung in eine Einzelzellen-Suspension zu pipetten! Stellen Sie sicher, dass die Anzahl der Zellen in jeder Vertiefung bei der Aufteilung der Platte konsistent ist!
Natürlich gibt es auch Verarbeitungsfaktoren. Die Parallelität zwischen den Brunnen ist ebenfalls sehr wichtig. Mischen Sie beispielsweise beim Hinzufügen von Medikamenten das Medikament nach der Verdünnung, um sicherzustellen, dass die Konzentration jeder Vertiefung konsistent ist!
Darüber hinaus sollten beim Hinzufügen von Zellen und Arzneimitteln die Testgruppe und die Kontrollgruppe zugesetzt werden, um den Unterschied in der Zelldichte und der Arzneimittelkonzentration zu vermeiden, die durch die Abfolge von Additionsproben verursacht werden!

fragen:
Das Blasen ist bereits einheitlich, aber die Plänen, 6 Löcher und 24 Löcher sind immer etwas ungleichmäßig und in der Mitte ein wenig konzentriert. Darüber hinaus ist es offensichtlich, dass die Zählung durchgeführt wird, und nach ein oder zwei Tagen ist die Dichte jedes Lochs unterschiedlich, was die Erkennung beeinflusst. Gibt es einen guten Weg?

antworten:
Wenn Sie eine Pasteur -Pipette verwenden, saugen Sie nicht jedes Mal zu viel zu viel Folgen Sie der S-Form-Route.
Wenn Sie eine Pipette verwenden, sollten die Spitzen verarbeitet und entfernt werden, um die Zellen zu beschädigen, sodass jedes Mal, wenn die Flüssigkeit eingenommen wird, einem Brunnen entspricht. Es ist genauer, ein-zu-ein-Loch mit Tipp hinzuzufügen. Achten Sie auch darauf, die Federung zu mischen.

Um eine parallele Gruppe einzurichten, muss N groß genug sein (Sie können sie berechnen).

Nach dem Übernehmen nicht schütteln, da das Schütteln die Zellen in Richtung der Mitte aggregiert. Es ist am besten, einmal zu planken.

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